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        人iPS细胞基因编辑解决方案,Disease model in a dish
         
        人诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs) 具备多向分化潜能和自我更新能力,同时可保留细胞来源个体的遗传背景。结合CRISPR/Cas9基因编辑技术,可以打造肝脏、心脏、神经等多种疾病模型,进行遗传变异的功能性研究以及更深远的再生医学研究。
        Takara提供多款工具,针对性解决人iPS细胞基因编辑关键操作和挑战。
         
        关键操作之基因编辑人iPS细胞
         
        CRISPR/Cas9基因编辑技术的两个组件(Cas9核酸酶和sgRNA)可以通过多种方法导入至靶细胞,如载体表达系统,RNA转染系统,或直接导入Cas9/sgRNA核糖核蛋白(RNP)复合物(Sander and Joung 2014)。与载体表达系统相比,直接导入Cas9/sgRNA RNPs更加快速,同时脱靶效应的可能性更小 (Kim et al. 2014)。
         
        对于难转染的人iPS细胞,Takara提供一种Cas9/sgRNA RNPs导入方法-电穿孔Electroporation导入系统(632643)实现高效的、低脱靶效应的基因编辑。
         
         
        Code No. Product Size
        632643 Cellartis® iPSC rCas9 Electroporation and Single-Cell Cloning System 1 Kit
         
        关键操作之获得所需突变的单细胞克隆
         
         
        一旦Cas9/sgRNA RNP复合物被导入, 为了分离和筛选感兴趣的基因型,需要进一步分离成单细胞并扩增为单克隆。传统的人iPS 细胞以集落状生长和传代,不利于进行单细胞分离和单细胞培养,为基因编辑后建立单克隆增加了难度。
         
        Takara旗下的DEF-CS 培养系统(Asplund et al. 2016),支持人多能干细胞无血清,无饲养层,单层均匀、非集落状生长,规避了集落状生长带来的挑战,允许单细胞传代和促进接种后的单细胞存活和扩增,更利于获得基因编辑后感兴趣突变的单克隆。建议使用Y30010进行人iPS细胞常规培养,使用Y30021进行人iPS细胞单克隆培养。
         
        Code No. Product Size
        Y30010 Cellartis® DEF-CS 500 Culture System 1 Kit
        Y30021 Cellartis® iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit 1 Kit
         
        参考文献:
        · Asplund, A. et al. One Standardized Differentiation Procedure Robustly Generates Homogenous Hepatocyte Cultures Displaying Metabolic Diversity from a Large Panel of Human Pluripotent Stem Cells. Stem Cell Rev. Reports 12, 90–104 (2016).
        · Kim, S., Kim, D., Cho, S. W., Kim, J. & Kim, J.-S. Highly efficient RNA-guided genome editing in human cells via delivery of purified Cas9 ribonucleoproteins. Genome Res. 24, 1012–9 (2014).
        · Sander, J.-D. & Joung, J.-K. CRISPR-Cas9 systems for genomic editing, regulation and targeting. Nat. Biotechnol. 32, 347–55 (2014).
         
        实验案例:
        1. 在人iPS细胞的内源性基因插入AcGFP1标签
        Tagging an endogenous gene with AcGFP1 in hiPS cells
         
         
        2. 在人iPS细胞内源性基因插入myc标签
        Tagging an endogenous gene with a myc tag in hiPS cells
         
        3. 人iPS细胞敲除内源性基因CD81
        Knocking out an endogenous gene (CD81) in hiPS cells
         
        4. 在人iPS细胞内引入酪氨酸血症相关SNP
        Introducing a tyrosinemia-related SNP in hiPS cells
         
        5. 在人iPS细胞的AAVS1位点插入表达框
        Inserting an expression cassette into the AAVS1 locus in hiPS cells
         
        6. 使用电穿孔法编辑人iPS细胞
        Editing hiPS cells using electroporation
         
        7. 建立人iPS细胞的单细胞克隆
        Single-cell cloning of hiPS cells

         
         
         

        产品分类

        人iPS细胞基因编辑用产品